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外泌體的提純與凍干

發(fā)布時(shí)間:2025-10-19   點(diǎn)擊次數(shù):61次

外泌體差速超速離心提純方法:

DUC 是最早和最常報(bào)道的外泌體分離策略。操作步驟如下。該方法過(guò)程簡(jiǎn)單,不引入其他標(biāo)記,適用于大劑量樣品分析。然而,鑒于細(xì)胞外液具有高度異質(zhì)性,DUC 可導(dǎo)致非理想的外泌體聚集; 因此,它可能不是一種合適的外泌體純化方法,因?yàn)榇笮∠嗨频牟煌遗莺偷鞍踪|(zhì)聚集體可以在 100,000 × g 下共同形成。因此,應(yīng)進(jìn)一步純化使用該方法制備的外泌體。此外,離心力會(huì)導(dǎo)致外泌體結(jié)構(gòu)的破壞,進(jìn)而影響下游實(shí)驗(yàn),特別是外泌體的功能分析。

 

外泌體凍干工藝開(kāi)發(fā)與處方設(shè)計(jì): 

1. 核心目標(biāo): 保持外泌體完整性(膜結(jié)構(gòu)、RNA/蛋白質(zhì)活性);提高凍干后復(fù)溶性及長(zhǎng)期穩(wěn)定性。

2. 關(guān)鍵步驟與實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)保護(hù)劑篩選:常用海藻糖、蔗糖、甘露醇等非還原性糖類,通過(guò)氫鍵穩(wěn)定脂質(zhì)雙層結(jié)構(gòu),減少冰晶損傷。 實(shí)驗(yàn)方案:對(duì)比不同保護(hù)劑(如海藻糖濃度梯度)對(duì)外泌體粒徑、Zeta電位、蛋白質(zhì)含量的影響。 

凍干曲線優(yōu)化: 分析指標(biāo):水分殘留量(<3%)、復(fù)溶時(shí)間(<1分鐘)、形態(tài)(納米流式檢測(cè),需要由用戶完成)。 

外泌體凍干可提供如下服務(wù):

1.  提供外泌體凍干配方開(kāi)發(fā)。

2.  提供外泌體凍干工藝曲線開(kāi)發(fā)。

3.  提供外泌體凍干生產(chǎn)放大工藝開(kāi)發(fā)。

4.  提供外泌體上下游凍干設(shè)備開(kāi)發(fā)。